Invivo and invitro evaluation of antitumor effects of iron oxide and folate core shell-iron oxide nanoparticles / Avaliação in vivo e in vitro dos efeitos antitumorais de nanopartículas de óxido de ferro e óxido de ferro com núcleo de folato

Abstract Nanoparticles are considered viable options in the treatment of cancer. This study was conducted to investigate the effect of magnetite nanoparticles (MNPs) and magnetite folate core shell (MFCS) on leukemic and hepatocarcinoma cell cultures as well as their effect on the animal model of acute myelocytic leukemia (AML). Through current study nanoparticles were synthesized, characterized by various techniques, and their properties were studied to confirm their nanostructure. Invivo study, nanoparticles were evaluated to inspect their cytotoxic activity against SNU-182 (human hepatocellular carcinoma), K562 (human leukemia), and THLE2 (human normal epithelial liver) cells via MTT test. Apoptotic signaling proteins Bcl-2 and Caspase-3 expression were inspected through RT-PCR method. A cytotoxic effect of MNPs and MFCS was detected in previous cell cultures. Moreover, the apoptosis was identified through significant up-regulation of caspase-3, with Bcl-2 down-regulation. Invitro study, AML was induced in rats by N-methyl-N-nitrosourea followed by oral treatment with MNPS and MFCS. Biochemical indices such as aspartate and alanine amino transferases, and lactate dehydrogenase activities, uric acid, complete blood count, and Beta -2-microglubulin were assessed in serum. Immunophenotyping for CD34 and CD38 detection was performed. Liver, kidney, and bone marrow were microscopically examined. Bcl-2 promoter methylation, and mRNA levels were examined. Although, both MNPs and MFCS depict amelioration in biochemical parameters, MFCS alleviated them toward normal control. Anticancer activity of MNPs and MFCS was approved especially for AML. Whenever, administration of MFCS was more effective than MNPs. The present work is one of few studies used MFCS as anticancer agent.

Resumo Nanopartículas são consideradas opções viáveis ​​no tratamento do câncer. Este estudo foi conduzido para investigar o efeito de nanopartículas de magnetita (MNPs) e núcleo de folato de magnetita (MFCS) em culturas de células leucêmicas e de hepatocarcinoma, bem como seu efeito no modelo animal de leucemia mielocítica aguda (LMA). Através do atual estudo, nanopartículas foram sintetizadas, caracterizadas por várias técnicas, e suas propriedades foram estudadas para confirmar sua nanoestrutura. No estudo in vivo, as nanopartículas foram avaliadas para inspecionar sua atividade citotóxica contra células SNU-182 (carcinoma hepatocelular humano), K562 (leucemia humana) e THLE2 (fígado epitelial humano normal) por meio do teste MTT. A expressão das proteínas sinalizadoras apoptóticas Bcl-2 e Caspase-3 foram inspecionadas através do método RT-PCR. Um efeito citotóxico de MNPs e MFCS foi detectado em culturas de células anteriores. Além disso, a apoptose foi identificada por meio de regulação positiva significativa da Caspase-3, com regulação negativa de Bcl-2. No estudo in vitro, a AML foi induzida em ratos por N-metil-N-nitrosoureia seguida por tratamento oral com MNPS e MFCS. Índices bioquímicos como aspartato e alanina aminotransferases e atividades de lactato desidrogenase, ácido úrico, hemograma completo e Beta-2-microglubulina foram avaliados no soro. A imunofenotipagem para detecção de CD34 e CD38 foi realizada. Fígado, rim e medula óssea foram examinados microscopicamente. A metilação do promotor Bcl-2 e os níveis de mRNA foram examinados. Embora tanto os MNPs quanto os MFCS representem uma melhora nos parâmetros bioquímicos, o MFCS os aliviou em direção ao controle normal. A atividade anticâncer de MNPs e MFCS foi aprovada especialmente para AML. Sempre, a administração de MFCS foi mais eficaz do que MNPs. O presente trabalho é um dos poucos estudos que utilizou o MFCS como agente anticâncer.

Invivo and invitro evaluation of antitumor effects of iron oxide and folate core shell-iron oxide nanoparticles

Abstract Nanoparticles are considered viable options in the treatment of cancer. This study was conducted to investigate the effect of magnetite nanoparticles (MNPs) and magnetite folate core shell (MFCS) on leukemic and hepatocarcinoma cell cultures as well as their effect on the animal model of acute myelocytic leukemia (AML). Through current study nanoparticles were synthesized, characterized by various techniques, and their properties were studied to confirm their nanostructure. Invivo study, nanoparticles were evaluated to inspect their cytotoxic activity against SNU-182 (human hepatocellular carcinoma), K562 (human leukemia), and THLE2 (human normal epithelial liver) cells via MTT test. Apoptotic signaling proteins Bcl-2 and Caspase-3 expression were inspected through RT-PCR method. A cytotoxic effect of MNPs and MFCS was detected in previous cell cultures. Moreover, the apoptosis was identified through significant up-regulation of caspase-3, with Bcl-2 down-regulation. Invitro study, AML was induced in rats by N-methyl-N-nitrosourea followed by oral treatment with MNPS and MFCS. Biochemical indices such as aspartate and alanine amino transferases, and lactate dehydrogenase activities, uric acid, complete blood count, and Beta -2-microglubulin were assessed in serum. Immunophenotyping for CD34 and CD38 detection was performed. Liver, kidney, and bone marrow were microscopically examined. Bcl-2 promoter methylation, and mRNA levels were examined. Although, both MNPs and MFCS depict amelioration in biochemical parameters, MFCS alleviated them toward normal control. Anticancer activity of MNPs and MFCS was approved especially for AML. Whenever, administration of MFCS was more effective than MNPs. The present work is one of few studies used MFCS as anticancer agent.

Resumo Nanopartículas são consideradas opções viáveis no tratamento do câncer. Este estudo foi conduzido para investigar o efeito de nanopartículas de magnetita (MNPs) e núcleo de folato de magnetita (MFCS) em culturas de células leucêmicas e de hepatocarcinoma, bem como seu efeito no modelo animal de leucemia mielocítica aguda (LMA). Através do atual estudo, nanopartículas foram sintetizadas, caracterizadas por várias técnicas, e suas propriedades foram estudadas para confirmar sua nanoestrutura. No estudo in vivo, as nanopartículas foram avaliadas para inspecionar sua atividade citotóxica contra células SNU-182 (carcinoma hepatocelular humano), K562 (leucemia humana) e THLE2 (fígado epitelial humano normal) por meio do teste MTT. A expressão das proteínas sinalizadoras apoptóticas Bcl-2 e Caspase-3 foram inspecionadas através do método RT-PCR. Um efeito citotóxico de MNPs e MFCS foi detectado em culturas de células anteriores. Além disso, a apoptose foi identificada por meio de regulação positiva significativa da Caspase-3, com regulação negativa de Bcl-2. No estudo in vitro, a AML foi induzida em ratos por N-metil-N-nitrosoureia seguida por tratamento oral com MNPS e MFCS. Índices bioquímicos como aspartato e alanina aminotransferases e atividades de lactato desidrogenase, ácido úrico, hemograma completo e Beta-2-microglubulina foram avaliados no soro. A imunofenotipagem para detecção de CD34 e CD38 foi realizada. Fígado, rim e medula óssea foram examinados microscopicamente. A metilação do promotor Bcl-2 e os níveis de mRNA foram examinados. Embora tanto os MNPs quanto os MFCS representem uma melhora nos parâmetros bioquímicos, o MFCS os aliviou em direção ao controle normal. A atividade anticâncer de MNPs e MFCS foi aprovada especialmente para AML. Sempre, a administração de MFCS foi mais eficaz do que MNPs. O presente trabalho é um dos poucos estudos que utilizou o MFCS como agente anticâncer.

Principios generales que rigen la investigación científica en contexto de gran altitud, caso Bolivia: diagnóstico de anemia en altitud / General principles governing scientific research in a high altitude context, case of Bolivia: diagnosis of anemia at altitude

La importancia de la investigación científica referida a la definición de la anemia por deficiencia de hierro en altitud, se relaciona con los hallazgos de los estudios realizados y que permiten avanzar al conocimiento científico, en poblaciones vulnerables, siendo que están dirigidos a mejorar la salud pública e influir en políticas de salud. Se presenta el análisis y reflexión de una innovadora modalidad para nuestro medio de altitud, basada en la suplementación con hierro y folatos para definir anemia en la población estudiada, situación que difiere de investigaciones previas sobre el tema en nuestro contexto de altitud. Estos estudios han tenido un escrutinio intenso de parte de los revisores que han valorado las publicaciones sobre anemia ferropénica a gran altitud. La claridad de los diseños de ensayos clínicos formales y controlados aleatorizados, pertinentes en tiempo y necesarios por su importancia fueron realizados, en regiones de altitud de Bolivia. La falta de reconocimiento por terceros de este nivel de evidencia logrado, equivaldría a sustituirlos por estudios de ensayos no formales y no controlados, es decir seguir aplicando diseños de tipo observacional, con contrastación teórica y lógica que solo incrementan el estado de incertidumbre sobre el tema en Bolivia. El sumario presentado de la historia sobre la anemia ferropénica en regiones de altitud en Bolivia nos permite reflexiones importantes, a saber: 1. Es importante resaltar, como claro ejemplo, que la observación simple puede llevar a la incertidumbre y lo costoso de sus consecuencias futuras por la persistencia de la anemia ferropénica en poblaciones de altitud, más aún si se mantiene el posible manejo de prueba y error en resultados difundidos. 2. Se demuestra la necesidad de los controles en la investigación científica, y finalmente 3. Los ensayos clínicos controlados aleatorizados son la mejor fuente de evidencia confiable.

The importance of scientific research related to the definition of iron deficiency anemia at altitude is related to the findings of the studies carried out and that allow advancing scientific knowledge, in vulnerable populations, being that they are aimed at improving public health and influence health policies. The analysis and reflection of an innovative modality for our altitude environment is presented, based on supplementation with iron and folates to define anemia in the studied population, a situation that differs from previous research on the subject in our altitude context. These studies have received intense scrutiny from reviewers who have evaluated the publications on high altitude iron deficiency anemia. The clarity of the designs of formal and randomized controlled clinical trials, pertinent in time and necessary due to their importance, were carried out in highland regions of Bolivia. The lack of recognition by third parties of this level of evidence achieved, would be equivalent to replacing them with studies of non-formal and uncontrolled trials, that is, to continue applying observational designs, with theoretical and logical contrast that only increase the state of uncertainty on the subject in Bolivia. The summary presented of the history of iron deficiency anemia in high-altitude regions of Bolivia allows us important reflections, namely: 1. It is important to highlight, as a clear example, that simple observation can lead to uncertainty and the cost of its future consequences due to the persistence of iron deficiency anemia in high altitude populations, even more so if the possible trial and error management is maintained in disseminated results. 2. The need for controls in scientific research is demonstrated, and finally 3. Randomized controlled clinical trials are the best source of reliable evidence.

A importância do metilfolato na prevenção dos defeitos abertos do tubo neural / The importance of methylfolate in the prevention of open neural tube defects

A suplementação periconcepcional com vitamina B9 ou folato é considerada medida efetiva para diminuir a ocorrência e a recorrência de defeitos do tubo neural (DTNs). É recomendada para todas as mulheres que planejam gravidez ou que possam engravidar. O ácido fólico necessita passar por processos enzimáticos necessários à metabolização para a sua forma ativa L-5-metiltetrahidrofolato (L-metilfolato, 5-MTHF) envolvida nos processos biológicos e que circula no plasma. A enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) é de fundamental importância para fornecer 5-MTHF, forma biologicamente ativa. A presença de polimorfismo do gene da MTHF-redutase promove menor atividade enzimática e menor produção de L-metilfolato.(AU)

Programación fetal y modificaciones epigenéticas relacionadas al folato / Fetal programming and epigenetic modifications caused by folate

RESUMEN La vida fetal se caracteriza por su capacidad para responder a factores ambientales. La nutrición es el factor ambiental más importante que influye en los procesos de desarrollo a través de la regulación de los mecanismos epigenéticos. La identificación del papel de los factores dietéticos que modulan y remodelan el epigenoma fetal durante el desarrollo, incluidos donantes del grupo metilo, es de gran importancia. La epigenética estudia aquellos cambios heredados en la expresión genética que no están relacionados con las modificaciones en la secuencia de ADN. El metabolismo del folato regula el suministro de grupos metilo; por lo tanto, los trastornos alimentarios pueden influir en la regulación de los mecanismos epigenéticos. El papel crucial del folato en la división celular, así como en la conversión de homocisteína, ha sido demostrado en forma concluyente. Debido a que los procesos epigenéticos son una de las vías del proceso de programación fetal, el suministro anormal de folato puede producir anomalías fetales y mayor riesgo de enfermedades crónicas en la vida adulta. El objetivo de la revisión fue establecer la asociación entre la programación fetal y las modificaciones epigenéticas causadas por el folato.

ABSTRACT Fetal life is characterized by the ability to respond to environmental factors. Nutrition is the most important environmental factor influencing development processes by regulating epigenetic mechanisms. Identifying the role of dietary factors that modulate and remodel the fetal epigenome during development, including the methyl-group donors, is of great importance. Epigenetics studies inherited changes in gene expression not related to modifications in the DNA sequence. Folate metabolism regulates the supply of methyl groups; therefore, eating disorders may influence regulation of epigenetic mechanisms. The crucial role of folate in cell division and homocysteine conversion has been conclusively demonstrated. Because epigenetic processes are one of the pathways in fetal programming, abnormal folate delivery may lead to fetal abnormalities and risk of chronic diseases in adulthood. The objective of this review is to establish the association between fetal programming and epigenetic modifications caused by folate.

Seleção e aplicação de bactérias láticas produtoras de folato para obtenção de um leite fermentado bioenriquecido e avaliação de biodisponibilidade do folato produzido / Screening and application of folate-producing lactic acid bacteria for production of bioenriched fermented milk and evaluation of the bioavaliability of the produced folate

A deficiência de folato é um problema de saúde pública que vem sendo combatido através da fortificação obrigatória de ácido fólico. Entretanto, a ingestão excessiva pode causar efeitos colaterais indesejados. A forma natural da vitamina produzida por algumas cepas de bactérias láticas pode ser uma alternativa segura para aumentar a ingestão de folato pela população. Este trabalho visou selecionar as melhores cepas de BAL produtoras de folato, identificar as melhores condições para a produção da vitamina e avaliar a biodisponibilidade do folato produzido pelas cepas no leite fermentado, empregando-se testes em modelos animais. O estudo foi desenvolvido com cinco cepas de Streptococcus thermophilus (34v, 170v, 268v, 361v e 341 pc) e um cepa de Lactobacillus plantarum (16cv), todas boas produtoras de folato. As condições de produção e a combinação de cepas que resultaram na melhor produção folato foram utilizadas para produzir um leite biofermentado (BFM), avaliando-se a biodisponibilidade da vitamina produzida empregando-se um modelo animal de depleção/repleção, com camundongos Balb/c submetidos a 14 dias de depleção, seguido de 21 dias de repleção da vitamina. Após os 35 dias, os animais foram sacrificados, retirando-se sangue, rins, fígado, baço e intestino para quantificação de folato e avaliação histológica da mucosa intestinal. Todas as quantificações de folato foram feitas pelo método microbiológico. A melhor combinação de cepas (St. Thermophilus 34v + Lb. Plantarum 16cv) resultou na produção de 300 ng/mL de folato, sendo a temperatura de 42ºC melhor que 37ºC para a produção da vitamina. A produção de folato no leite na fermentação em pH controlado 6,0 foi 35% superior à observada no leite fermentado em pH livre. As concentrações de folato no baço e glóbulos vermelhos foram mais altas nos camundongos que ingeriram leite fermentado bioenriquecido (BFM) em relação aos demais grupos de animais. A relação vilosidade/cripta nos camundongos dos grupos BFM foi igual à observada nos animais que receberam leite suplementado com ácido fólico. Houve aumento da hemoglobina, hematócrito e hemácias nos camundongos que ingeriram BFM, evidenciando a bioeficácia do folato produzido. Esses resultados indicam que a produção de folato por bactérias láticas selecionadas em produtos fermentados pode ser uma boa alternativa para aumentar a ingestão de vitamina B9 pela população

A deficiência de folato é um problema de saúde pública que vem sendo combatido através da fortificação obrigatória de ácido fólico. Entretanto, a ingestão excessiva pode causar efeitos colaterais indesejados. A forma natural da vitamina produzida por algumas cepas de bactérias láticas pode ser uma alternativa segura para aumentar a ingestão de folato pela população. Este trabalho visou selecionar as melhores cepas de BAL produtoras de folato, identificar as melhores condições para a produção da vitamina e avaliar a biodisponibilidade do folato produzido pelas cepas no leite fermentado, empregando-se testes em modelos animais. O estudo foi desenvolvido com cinco cepas de Streptococcus thermophilus (34v, 170v, 268v, 361v e 341 pc) e um cepa de Lactobacillus plantarum (16cv), todas boas produtoras de folato. As condições de produção e a combinação de cepas que resultaram na melhor produção folato foram utilizadas para produzir um leite biofermentado (BFM), avaliando-se a biodisponibilidade da vitamina produzida empregando-se um modelo animal de depleção/repleção, com camundongos Balb/c submetidos a 14 dias de depleção, seguido de 21 dias de repleção da vitamina. Após os 35 dias, os animais foram sacrificados, retirando-se sangue, rins, fígado, baço e intestino para quantificação de folato e avaliação histológica da mucosa intestinal. Todas as quantificações de folato foram feitas pelo método microbiológico. A melhor combinação de cepas (St. Thermophilus 34v + Lb. Plantarum 16cv) resultou na produção de 300 ng/mL de folato, sendo a temperatura de 42ºC melhor que 37ºC para a produção da vitamina. A produção de folato no leite na fermentação em pH controlado 6,0 foi 35% superior à observada no leite fermentado em pH livre. As concentrações de folato no baço e glóbulos vermelhos foram mais altas nos camundongos que ingeriram leite fermentado bioenriquecido (BFM) em relação aos demais grupos de animais. A relação vilosidade/cripta nos camundongos dos grupos BFM foi igual à observada nos animais que receberam leite suplementado com ácido fólico. Houve aumento da hemoglobina, hematócrito e hemácias nos camundongos que ingeriram BFM, evidenciando a bioeficácia do folato produzido. Esses resultados indicam que a produção de folato por bactérias láticas selecionadas em produtos fermentados pode ser uma boa alternativa para aumentar a ingestão de vitamina B9 pela população

Effect of vegetable by-products on folate production by starter and probiotic microorganisms to develop a bio-enriched fermented soy product / Efeito de subprodutos vegetais na produção de folatos por microrganismos starter e probióticos para o desenvolvimento de um produto de soja fermentado bioenriquecido

However, folate production was strain-dependent and also dependent on the environmental conditions and on the vegetable substrate used. Passion fruit by-product presented the lowest folate concentration and was selected for the following experiments. Thus, the impact of the supplementation of soymilk with passion fruit by-product and/or commercial prebiotic fructooligosaccharides FOS P95 on the folate production by three St. thermophilus strains, as well as four probiotic Lactobacillus strains (LA-5, LGG, PCC, and RC-14) were evaluated. St. thermophilus ST-M6 and TH-4 produced the highest amounts of folate in all fermented soymilks. The concentration of the vitamin was also high when these strains grew in co-culture with LA-5 and LGG. Soymilk supplemented with both passion fruit by-product and FOS together presented the highest concentration of folate when fermented by the co-culture TH-4+LGG. This co-culture was selected to produce four fermented soy products (FSP). All FSP were bio-enriched with folate produced by the co-culture and the probiotic strain LGG remained always above 8 log CFU/mL until the end of the storage period (28 days at 4ºC). In contrast, the concentration of the vitamin was stable until day 14 then a slight decrease was observed at the end of the storage period. The FSP supplemented with both passion fruit by-product and FOS together may contribute with around 14% of the recommended daily intake for folate if consumed until day 14 of storage. During the in vitro simulated gastrointestinal conditions, the folate content of the digested FSP increased from 1.3 to 3.6-fold, especially at the small and large intestinal in vitro phases and the strain LGG was recovered. In contrast, St. thermophilus TH-4 was not recovered during the assay. Finally, the prebiotic potential of the bioactive compounds present in the fruit by-products was characterized. Fruit by-product water extracts (FWE) containing soluble fibres from fruit by-products were obtained through a hot-water extraction and were associated to phenolic compounds and showed antioxidant activity. The FWE (especially, orange and mango water extracts) presented an anti-inflammatory potential by decreasing the nitric oxide concentration produced in vitro by macrophages stimulated with lipopolisaccharides (LPS) from Salmonella Thyphymurium. The FWE (especially from mango) were able to stimulate the growth of the strains TH-4 and LGG, as well the folate production by these microorganisms when tested individually and in co-culture. The FWE also increased the adhesion of TH-4 and LGG to Caco-2 cells in an in vitro model. These results suggest a prebiotic potential of the fruit by-products evaluated and their potential towards increased folate production by the selected microorganisms. Therefore, the bio-enrichment of fermented soy products with folate produced by beneficial microorganisms is an alternative for the development of functional foods with high folate content. Additionally, fermentable bioactive compounds with functional and/or biological activity, such as soluble fibres associated to phenolic compounds with antioxidant activity, present in the fruit by-products, may act as potential prebiotic ingredients. These bioactive molecules may represent a potential natural alternative to synthetic drugs for the treatment of inflammatory processes

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de subprodutos vegetais, incluindo subprodutos do processamento de fruta (maracujá, laranja, acerola e manga) e de soja (okara) na produção de folatos de novo por microrganismos strater e probióticos para bioenriquecer um produto de soja fermentado. Na primeira etapa deste trabalho, o impacto da farinha de amaranto na produção de folatos pelos microrganismos também foi avaliado. Neste sentido, primeiramente, verificou-se o efeito desses subprodutos vegetais e da farinha de amaranto na capacidade de três cepas starter - Streptococcus thermophilus (ST-M6, TH-4 e TA-40) e 10 cepas probióticas (Lactobacillus (Lb.) acidophilus LA-5, Lb. fermentum PCC, Lb. reuteri RC-14, Lb. paracasei subsp. paracasei Lb. casei 431, Lb. paracasei subsp. paracasei F19, Lb. rhamnosus GR-1, and Lb. rhamnosus LGG, Bifidobacterium (B.) animalis subsp. lactis BB-12, B. longum subsp. longum BB-46, e B. longum subsp. infantis BB-02) em produzir folato utilizando um caldo MRS modificado. A maior parte dos microrganismos testados foi capaz de produzir folato. Entretanto, a produção foi considerada cepa-dependente e, também, dependente das condições ambientais e do tipo de subproduto vegetal empregado. O subproduto de maracujá apresentou a menor concentração de folato e, por isso, foi selecionado para os testes seguintes. Neste sentido, o impacto da suplementação do leite de soja com subproduto de maracujá e/ou com o prebiótico comercial fruto-oligosacarídeo FOS P95 na produção de folato pelas três cepas de St. thermophilus, bem como quarto cepas probióticas do gênero Lactobacillus (LA-5, LGG, PCC e RC-14), também foi avaliado. Em cultura pura, as cepas de St. thermophilus ST-M6 e TH-4 produziram grande quantidade de folato nas formulações de extrato de soja fermentados. A concentração da vitamina foi maior quando tais cepas se desenvolveram em co-cultura com LA-5 e LGG. Observou-se que o extrato de soja suplementado concomitantemente com subproduto de maracujá e FOS apresentou a maior quantidade de folato quando fermentado pela co-cultura TH-4+LGG. Esta co-cultura, portanto, foi selecionada para desenvolver os produtos fermentados de soja (PFS). Todas as formulações foram bioenriquecidas e a cepa LGG manteve-se viável por todo o período de armazenamento (28 dias a 4ºC). Entretanto, a concentração da vitamina manteve-se estável apenas até o dia 14, observando-se uma diminuição da quantidade de folato ao final do período de armazenamento. Constatou-se que o produto fermentado de soja suplementado concomitantemente com subproduto de maracujá e FOS pode contribuir com cerca de 14% da ingestão diária recomendada para folato se consumido até o dia 14 do armazenamento. Além disso, durante a simulação gastrointestinal in vitro, observou-se que a digestão aumentou de 1,3 a 3,6 vezes a concentração da vitamina incrementando, consideravelmente, a bioacessibilidade do folato, principalmente nas porções simuladas do intestino delgado e grosso do intestino e a cepa LGG foi recuperada. Entretanto, a cepa St. thermophilus TH-4 não foi recuperada durante o ensaio. Por fim, o potencial prebiótico de componentes bioativos presentes nos subprodutos de fruta foi caracterizado. Uma extração Hot Water foi conduzida, a fim de obter extratos aquosos de subprodutos de fruta ricos em fibras solúveis associadas a compostos fenólicos com atividade antioxidante. Observou-se, ainda, que tais extratos aquosos de subprodutos de fruta (laranja e manga) apresentaram potencial anti-inflamatório constatado pela diminuição da concentração de óxido nítrico produzido por macrófagos estimulados com lipopolissacarideo (LPS) de Salmonella Typhymurium in vitro. Além disso, os extratos aquosos de subprodutos de fruta (principalmente o extrato aquoso de subproduto de manga) foram capazes de estimular a multiplicação das cepas TH-4 e LGG, bem como a produção de folatos por estes microrganismos quando avaliados individualmente e em co-cultura. Adicionalmente, esses extratos aquosos de subprodutos de fruta aumentaram a adesao do TH-4 e do LGG a células Caco-2 em modelo in vitro. Neste sentido, os resultados sugerem um potencial prebiótico dos subprodutos de fruta testados, de modo a estimular, não somente o desenvolvimento dos microrganismos avaliados mas, principalmente, o potencial destes em produzir folatos na presença dos substratos vegetais testados. O bioenriquecimento dos produtos fermentados de soja com folatos produzidos por microrganismos benéficos emerge como alternativa de alimento potencialmente funcional com alto teor de folato. Adicionalmente, compostos bioativos fermentescíveis e com atividade biológica como, por exemplo, as fibras solúveis associadas a compostos fenólicos com atividade antioxidante, presentes nos subprodutos de fruta testados podem constituir potenciais ingredientes prebióticos, além de representarem uma possível alternativa natural para o tratamento de processos inflamatórios

Pruebas bioquímicas para el diagnóstico de anemia megaloblástica / Biochemical tests for diagnosis of megaloblastic anemias / Testes bioquímicos para o diagnóstico de anemia megaloblástica

Es intención de este trabajo hacer un breve repaso sobre el metabolismo de la Vitamina B12 y del Folato o Vitamina B9. Estas dos vitaminas hidrosolubles juegan un papel importante en el metabolismo celular. Son cofactores de reacciones metabólicas de transferencia de grupos monocarbonados, esenciales para el mantenimiento de la vida. Además se describen las nuevas determinaciones de laboratorio, se evalúan cuáles son los estudios necesarios para arribar a un correcto diagnóstico del paciente con Anemia Macrocítica (AM), su etiología y cómo muchas drogas de uso frecuente en medicina producen AM. Se realiza también la evaluación del conjunto de metodologías que se pueden efectuar como rutina en el laboratorio especializado en hematología y se propone un algoritmo para el diagnóstico del paciente con AM.

The aim of this article is to make a little review on Vitamin B12 and Folate or Vitamin B9 metabolism. These hydrosoluble vitamins have a very important role in cell metabolism. They are cofactors in metabolic reactions of methyl group transfer, essential for life maintaining. Furthermore, new laboratory tests are described, and it is evaluated which the necessary studies are to arrive at a correct diagnosis for macrocytic anemia (MA) patients, their etiology, and how many drugs frequently used in medicine originate MA. Also, the set of methodologies that can be carried out routinely in the laboratory specialized in hematology is evaluated. Finally, a diagnosis algorithm to detect MA in patients is proposed.

Este trabalho visa a realizar uma breve revisão sobre o metabolismo da Vitamina B12 e do Folato ou Vitamina B9. Estas duas vitaminas hidrossolúveis têm um papel importante no metabolismo celular. São cofatores de reações metabólicas de transferência de grupos monocarbonados, essenciais para manter a vida. Também são descritas novas determinações de laboratório, avaliam-se quais são os estudos necessários para chegar a um diagnóstico correto do paciente com Anemia Macrocítica (AM), sua etiologia e de qué maneira muitas drogas de uso frequente em medicina produzem AM. Realiza-se também a avaliação do conjunto de metodologias que podem realizar-se como rotina no laboratório especializado em hematologia e se propõe um algoritmo para o diagnóstico do paciente com AM.

Neuropsychomotor development and genomic stability associated to folate and blood iron levels in preschool children / Desenvolvimento neuropsicomotor e estabilidade genômica associados aos níveis de folato e ferro sanguíneos de pré-escolares

Abstract Objectives: to evaluate the neuropsychomotor development and the genomic stability associated to folate and blood iron levels in preschool children. Methods: a cross-sectional study in which evaluated the biochemical exams (complete hemogram, serum ferritin, iron and folate), neuropsychomotor development (Denver II Test) and genotoxicity (micronuclei cytome in buccal mucosa cells) of 55 children aging 36-59 months old. Student´s T test, Kruskal-Wallis and Pearson's or Spearman's correlation tests were applied with a significance level of p<0.05 for data analysis. Results: the prevalence of anemia was 1.8%. The Denver II test classified 32.7% of the children as normal and 67.3% were suspected of having a delay. The children suspected of having a delay presented a slight reduction on hemoglobin and hematocrit (p=0.05 and p=0.14), intermediate reduction on iron and folate (p=0.29 and p=0.23) and a notable reduction on ferritin (p=0.03). Folate and iron were significantly associated to the frequency of cells with DNA damages (p<0.05). The frequency of binucleated cells was positively associated to the Red Cell Distribution Width (RDW) (r=0.56; p=0.02) in children without a delay and negatively with folate (r=-0.334; p=0.047) in children with a delay. Conclusions: this study showed a low prevalence of anemia, but a high rate of children suspected of having a neuropsychomotor, possibly associated to low ferritin levels. Additionally, iron and folate were associated to DNA damage which may have contributed to the psychomotor development delay.

Resumo Objetivos: avaliar o desenvolvimento neuropsicomotor e a estabilidade genômica associados ao folato e ferro sanguíneos em pré-escolares. Métodos: estudo transversal, no qual avaliou-se exames bioquímicos (hemograma completo, ferritina sérica, ferro e folato), desenvolvimento neuropsicomotor (Teste Denver II) e genotoxicidade (citoma de micronúcleos em células bucais esfoliadas) de 55 crianças com 36-59 meses de idade. Para a análise dos dados, empregou-se os testes T de Student, Kruskal-Wallis e correlação de Pearson ou Spearman, com nível de significância de p<0,05. Resultados: a prevalência de anemia foi de 1,8%. Pelo teste de Denver II foram classificadas 32,7% das crianças como normais e 67,3% como suspeita de atraso. As crianças com suspeita de atraso apresentaram pequena redução no hematócrito e hemoglobina (p=0,05 e p=0,14), redução intermediária de ferro e folato (p=0,29 e p=0,23) e redução marcante de ferritina (p=0,03). Ferro e folato associaram-se significativamente com a frequência de células com lesões no DNA (p<0,05). A frequência de células binucleadas associou-se positivamente com Red Cell Distribution Width (RDW) (r=0,56; p=0,02), nas crianças sem atraso e negativamente com folato (r=-0,33; p=0,05), nas crianças com atraso. Conclusões: este estudo mostrou baixa prevalência de anemia, mas elevada taxa de crianças com suspeita de atraso neuropsicomotor, possivelmente associada com baixos níveis de ferritina. Ademais, observou-se associação entre ferro e folato com dano no DNA, o que pode ter contribuído para o atraso neuropsicomotor.

Effect of alcohol and its metabolites in lung cancer: CAPUA study. / Efecto del alcohol y sus metabolitos en el cáncer de pulmón: estudio CAPUA.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Alcohol and its metabolites play an important role in carcinogenesis. This effect could be modulated by polymorphisms in genes encoding enzymes involved in the metabolism of alcohol and folate. Therefore, we analyzed the effect of alcohol consumption and ADH1B Arg48His, ADH1B Arg370Cys, ADH1C Ile349Val, ALDH2 Glu540Lys, CYP2E1 RsaI, CYP2E1 DraI, CYP2E1 TaqI and MTHFR C677T polymorphisms on the risk of developing lung cancer. PATIENTS AND METHODS: We included 876 lung cancer cases and 840 controls of the CAPUA hospital-based case-control study. Genotyping was performed using the Sequenom MassArray (iPLEX GOLD) technology. RESULTS: An alcohol consumption of 0.1-9.9g/day decreased lung cancer risk (ORadjusted=0.71; 95% CI 0.48-1.05), although statistical significance was not achieved. A consumption≥30g/day of alcohol and≥36PY of tobacco increases lung cancer risk (ORadjusted=26.68; 95% CI 12.69-56.10). On the other hand, a high consumption of vegetables (≥116.65g/day) and fruits (≥233.13g/day) decreases lung cancer risk with an alcohol consumption of 0.1-9.9g/day (ORadjusted=0.52; 95% CI 0.30-0.89; ORadjusted=0.58; 95% CI 0.33-1.03, respectively). An alcohol consumption of 10-29.9g/day in ADH1B 48His allele-carriers increases lung cancer risk (ORadjusted=3.32; 95% CI 1.03-10.70). CONCLUSIONS: Alcohol and polymorphisms in genes involved in the metabolism of alcohol and folate are related to the onset of lung cancer.

Factores determinantes del estado nutricional del folato y el rol de la variante genética C677T de la enzima metilen tetrahidrofolato reductasa (MTHFR) / Determinants of folate nutritional status and the role of the genetic variation of C677T methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) enzyme

Folate is an essential nutrient because mammals lack biological activity to synthesize. It different factors generate folate deficiency. Recent studies have identified that the C677T variant of the enzyme methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR), can play a role in serum folate concentrations (SFC) and red cell folate (RCF). The aim of this rewiev was to actualice some generalities of folate metabolism, factors related to its deficiency biochemical indicators used to assess the nutritional status of folate and role of the C677T polymorphism of the MTHFR enzyme on the cycle of folate and methionine. It is necessary to design studies with representative samples corroborating the effect of polymorphisms on biochemical indicators of nutritional status of folate and determine the dose-response effect and contribute to modify the nutritional recommendations with the necessary scientific evidence.

El folato es un nutriente esencial porque los mamíferos carecen de actividad biológica para sintetizarlo. Diferentes factores generar deficiencia de folato. Estudios recientes han identificado que la variante C677T de la enzima metilen tetrahidrofolato reductasa (MTHFR), puede jugar un papel en las concentraciones de folato sérico (FS) y eritrocitario (FE). El objetivo de este trabajo fue revisar algunas generalidades del folato, su metabolismo, los factores relacionados con su deficiencia, los indicadores bioquímicos utilizados para evaluar el estado nutricional del folato y el papel del polimorfismo C677T de la enzima MTHFR sobre el ciclo del folato y de la metionina. Es necesario diseñar estudios con muestras representativas que corroboren el efecto de los polimorfismos sobre los indicadores bioquímicos del estado nutricional del folato y determinar el efecto dosis-respuesta y así contribuir con la evidencia científica necesaria para modificar las recomendaciones nutricionales.

Nutritional status of iron, vitamin B12, folate, retinol and anemia in children 1 to 11 years old: Results of the Ensanut 2012 / Estado nutricional de hierro, vitamina B12, folato, retinol y anemia en niños de 1 a 11 años: Resultados de la Ensanut 2012

Objective. To describe the frequency of anemia, iron, vitamin B12, folate, retinol and predictors of anemia among Mexican children from Ensanut 2012. Materials and methods. Hemoglobin, ferritin, CRP, vitamin B12, retinol and folate concentrations were measured in 2 678 children aged 1-4 y and 4 275 children aged 5-11 y. Adjusted logistic regression models were constructed to assess the risk for anemia and micronutrient deficiencies. Results. In preschoolers and scholars, the overall prevalence of anemia was 20.4 and 9.7%, iron deficiency 14 and 9.3%, low vitamin B12 (LB12S) 1.9 and 2.6%; Folate 0.30 and 0%, and retinol depletion (VADp) 15.7 and 2.3%, respectively. ID and VADp were negatively associated with Hb (coefficient: -0.38 and -0.45, p<0.05); a higher log-CRP was associated with higher risk for anemia and VADp (OR=1.13 and OR=2.1, p<0.05, respectively). Conclusions. Iron deficiency, anemia and VADp are some of the main nutritional problems among Mexican infants.

Objetivo. Describir la frecuencia de anemia, deficiencia de hierro, vitamina B12, folato, retinol y predictores de la anemia en niños mexicanos de la Ensanut 2012. Material y métodos. Se midieron las concentraciones de hemoglobina, ferritina, PCR, vitamina B12, retinol y folato en 2 678 niños de 1-4 años y 4 275 niños de 5-11 años. Se construyeron modelos de regresión logística para evaluar el riesgo de anemia y deficiencias de micronutrientes. Resultados. La prevalencia de anemia en preescolares y escolares fue 20.4 y 9.7%; deficiencia de hierro (DH) 14 y 9.3%; baja concentración de vitamina B12 (BCB12) 1.9 y 2.6%; folato 0.30 y 0%, y depleción de vitamina A (DpVA), 15.7 y 2.3%, respectivamente. La DH y DpVA se asociaron negativamente con la Hb (coeficiente: -0.38 y -0.45, p<0.05); a mayor log-PCR, mayor riesgo de anemia y DpVA (OR=1.13 y OR=2.1, p<0.05, respectivamente). Conclusiones. DH, anemia y DpVA son algunos de los principales problemas de nutrición en niños mexicanos.

Bactérias láticas produtoras de folato e riboflavina: Isolamento e avaliação do seu potencial de aplicação na produção de produtos lácteos caprinos com alto teor de vitaminas / Folate and riboflavin producing lactic acid bacteria: isolation and evaluation of their potential application for production of goat dairy products with higher vitamin content

O valor nutricional e as características físico-químicas fazem com que os produtos lácteos caprinos sejam muito apreciados e tenham um alto valor agregado. Muitas bactérias láticas (BAL) possuem a capacidade de produzir compostos com propriedades benéficas à saúde, inclusive vitaminas do grupo B, como a riboflavina (B2) e o folato (B9), que participam de importantes funções metabólicas. O presente estudo objetivou isolar e identificar BAL capazes de produzir folato e riboflavina, utilizando leite de cabra cru e de queijos de cabra como fonte, para em seguida, avaliar a produção destas vitaminas em leite de cabra UHT, para estimar uma possível aplicação na produção de derivados lácteos de cabra com teores mais altos destas vitaminas. Um total de 179 isolados de BAL, sendo 87 provenientes de leite e 92 de queijos, foram obtidas e analisados quanto à produção de folato e de riboflavina extracelular (EC) e intracelular (IC), empregando-se ensaios microbiológicos apropriados. A produção de folato em meio de cultura a 37ºC foi observada em 151 isolados (84,4%) e de riboflavina em 15 isolados (8,4%), sendo que 14 produziram as duas vitaminas concomitantemente. A média da produção folato total (EC + IC) foi 138,8 µg/L, sendo que em 77 isolados (51%) a produção estava acima da média. Houve diferença significativa entre as médias de produção de folato total pelos isolados de leite e de queijo. A média da produção de riboflavina total (EC + IC) foi 363,7 µg/L, sendo que em 9 isolados (60%) a produção foi acima da média. Com base no RAPD-PCR e sequenciamento da porção 16S do rDNA, foram obtidos 19 perfis genéticos diferentes e identificadas 7 espécies, com predominância de Streptococcus thermophilus (7 isolados), Weissella paramensenteroides (6 isolados) e Lactococcus lactis subsp. lactis (4 isolados). Oito isolados produtores de folato acima da média foram selecionados e submetidos à avaliação da produção de folato em leite de cabra UHT a 37°C, sendo 7 positivas, com média da concentração de folato total de 120,55 µg/L, variando de 12,97 a 261,91 µg/L. Os melhores produtores de folato em leite de cabra UHT foram Lc. lactis subsp. lactis FP368 e St. thermophilus FP34v, FP170v e FP268v. A concentração de folato produzido por estes isolados foi acima da média, evidenciando seu interessante potencial de aplicação na produção de novos derivados lácteos caprinos com teores aumentados desta vitamina. Por outro lado, não foi possível detectar a produção de riboflavina em leite de cabra por nenhum dos isolados testados

Due to the high nutritional value and physicochemical characteristics, goat milk and cheeses are highly appreciated. Many strains of lactic acid bacteria (LAB) are able to produce vitamins from the B complex, such as riboflavin (B2) and folate (B9). These vitamins have important metabolic roles. The present study aimed to isolate riboflavin- and folate-producing LAB strains from goat milk and cheeses, and evaluate the potential application of those strains in the production of goat dairy products with higher content of these vitamins. A total of 179 LAB isolates were obtained from milk (87) and cheese (92) samples. The isolates were evaluated for production of extra (EC) and intracellular (IC) riboflavin and folate, applying appropriate microbiological methods. Among these isolates, 151 (84.4%) were able to produce folate, while 15 (8.4%) displayed the ability to produce riboflavin, and 14 produced both vitamins. The average production of total folate (EC + IC) was 138.8 µg/L, and the amount of folates produced by 77 isolates (51%) were above this average. The differences observed for the average production of total folate from milk and cheese isolates were statistically significant. For total riboflavin (EC+ IC), the average rate was 363.7 µg/L. Nine isolates (60%) presented production rates above the average. No significant difference was observed between the average production of total riboflafin from milk or cheese isolates (319.3 µg/L and 379.8 µg/L, respectively). Based on RAPD-PCR and 16S rDNA sequencing, 19 different genetic profiles were obtained and 7 species were identified, with predominance of Streptococcus thermophilus (7 isolates), Weissella paramensenteroides (6 isolates), and Lactococcus lactis subsp. lactis (4 isolates). Eight isolates that produced folate above the average were selected and tested for vitamins production in UHT goat milk at 37°C. Seven isolates produced an average of 120.55 µg/L of folate in the milk and concentration varied from 12.97 to 261,91 µg/L. The best folate producers were Lactococcus lactis subsp. lactis FP368, Streptococcus thermophilus FP34v, Streptococcus thermophilus FP170v and Streptococcus thermophilus FP268v. The amount of folate produced by these isolates surpassed the average, and was above the amounts described in other studies, evidencing their potential application in the production of goat dairy products with higher content of folate. None of the tested isolates was able to produce riboflavin in UHT goat milk

Experiencias globales de la fortificación de la harina con ácido fólico para disminuir los defectos del tubo neural / Global experiences with folic acid fortification of flour to reduce neural tube defects

Los defectos del tubo neural son defectos congénitos del cerebro y la médula espinal que pueden provocar discapacidad permanente o muerte en los bebés afectados. Se estima que globalmente hay 320.000 defectos del tubo neural cada año. De estos, aproximadamente tres cuartos se pueden prevenir si la mujer tiene un buen estado de folato en el periodo alrededor de la concepción. La fortificación masiva de alimentos aporta ácido fólico a la dieta de mujeres en el periodo peri-concepcional. De los 81 países que requieren la fortificación de harina de trigo o maíz, 77 obligan la adición de ácido fólico. Se ha documentado en varios países que la fortificación obligatoria y masiva de harina con ácido fólico aumenta niveles séricos de folatos y reduce defectos del tubo neural. Una meta-análisis ha estimado en 46% la reducción promedio en defectos del tubo neural a raíz de la fortificación masiva de harina con ácido fólico. La espina bífida es uno de los defectos del tubo neural que se puede prevenir con ácido fólico; el costo:beneficio de prevenir la espina bífida es favorable y se ha estimado entre 1:12 y 1:48. A pesar de estos éxitos, se estima que solamente 15% de los defectos del tubo neural que se pudieran prevenir con ácido fólico se están previniendo con fortificación masiva de harina. Existen lineamientos y experiencias globales para guiar aquellos países interesados en fortificar la harina con ácido fólico para reducir defectos del tubo neural(AU)

Neural tube defects are congenital anomalies of the brain and spine that can lead to permanent disability or death in affected babies. There are an estimated 320,000 neural tube defects annually throughout the world. Of these, approximately three-fourths are preventable if women have sufficient folate status in the peri-conceptional period. Mass food fortification contributes folic acid to women's diets in the peri-conceptional period. Of 81 countries that mandate wheat flour or maize flour fortification, 77 require the addition of folic acid. It has been documented in several countries that mandatory mass fortification of flour with folic acid increases blood folate levels and reduces neural tube defects. A metaanalysis estimated a 46% average reduction in neural tube defects due to folic-acid fortification of flour. The cost:benefit ratio of preventing spina bifida, a type of neural tube defect that can be prevented with folic acid, is favorable and estimated to be between 1:12 and 1:48. Despite these successes, it is estimated that only 15% of those neural tube defects that can be prevented by folic acid are being prevented through mass fortification of flour. There are international guidelines and experiences that interested countries can draw upon to fortify flour with folic acid to reduce neural tube defects(AU)

Avances en la fortificación de harina de trigo a nivel global / Advances in the fortification of wheat flour

: Por 90 años, alimentos han sido industrialmente fortificados (o enriquecidos) con vitaminas y minerales. Los granos básicos, específicamente la harina de trigo, la harina de maíz y el arroz, son aptos para la fortificación debido a su alta disponibilidad en la mayoría de países del mundo. El propósito de este artículo es revisar la evidencia del impacto en salud pública de la fortificación de granos básicos (con un enfoque en harina de trigo), describir los retos mundiales que enfrenta la fortificación y enlistar las herramientas que puedan ayudar con el diseño, el monitoreo y la evaluación de programas de fortificación de alimentos. Hay evidencia sólida y consistente que la fortificación con ácido fólico aumenta el folato sérico y reduce defectos del tubo neural, además de que la fortificación con hierro aumenta la ferritina sérica. Sin embargo, para la hemoglobina, los resultados son contradictorios: algunos estudios reportan un aumento, otros una disminución y otros ningún cambio en hemoglobina después de fortificar los granos básicos con diferentes nutrientes. Los dos retos principales de la fortificación mundial es que varios países se podrían beneficiar de la fortificación de granos cereales, sin embargo, no implementan esta intervención de salud pública. Además, son pocos los países que de manera consistente reportan los resultados de monitoreo y evaluación de sus programas de fortificación. Para abordar estos retos, hay varias herramientas disponibles o en desarrollo que guían el diseño, el monitoreo y la evaluación de programas de fortificación de alimentos(AU)

Food has been industrially fortified (or enriched) with vitamins and minerals for 90 years. Cereal grains, specifically wheat flour, maize flour and rice, are good vehicles for fortification because they are available in large amounts in most countries around the world. The purpose of this paper is to review the evidence for the public-health impact of fortification, describe challenges to worldwide fortification, and list tools that are available to aid in the design, monitoring and evaluation of food-fortification programs. There is strong and consistent evidence that folic-acid fortification of cereal grains improves serum folate and reduces neural tube defects, and that iron-fortification increases serum ferritin levels. The results for hemoglobin are equivocal: some studies report increases, others decreases, and others no change in hemoglobin after cereal-grain fortification commenced with several nutrients. The two main challenges to worldwide fortification are that many countries that could benefit from cereal-grain fortification do not undertake this public-health intervention, and that few countries consistently report monitoring or evaluation data that suggests they are keeping track of the implementation of fortification. Finally, to overcome these challenges, many tools are available or under development to help with the design, monitoring and evaluation of food-fortification programs(AU)

Asociación entre la alteración del metabolismo de la homocisteína metionina y folato, y el retardo de crecimiento intrauterino idiopático (RCIU): datos preliminares / The association between homocysteine-methionine and folate metabolism and pregnancy complicated by idiopathic intrauterine growth restriction: preliminary data

Objetivo: el objetivo general de esta investigación es hacer una aproximación para evaluar la asociación entre alteración del metabolismo de la homocisteínametionina y folato en embarazos complicados con restricción de crecimiento intrauterino (RCIU) idiopático, a través del estudio de los niveles de homocisteína pre y posparto, vitamina B12 y folato, así como las frecuencias alélicas y genotípicas de los polimorfismos genéticos de enzimas que participan en la vía metabólica de la homocisteína-metionina y folato en gestantes con embarazos complicados con RCIU idiopático y en condiciones fisiológicas en embarazo normal. Materiales y métodos: estudio piloto observacional analítico de tipo casos y controles. Se estudiaron 8 gestantes con embarazos con restricción de crecimiento intrauterino idiopático y 21 gestantes control con embarazos sin complicaciones y recién nacido sano. Se analizaron las concentraciones de folato, vitamina B12 y homocisteína en el tercer trimestre de embarazo, así como los niveles de homocisteína posparto. Se determinaron los genotipos de las gestantes para los polimorfismos MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTRR A66G, CBS 844ins68, CBS VNTR31pb, CBS C699T y CBS C1080T por medio de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP).Resultados: los polimorfismos MTHFR C677T y el genotipo 18/18 del polimorfismo CBS VNTR- 31pb, de manera independiente y en coexistencia, se asociaron a niveles bajos de folato. Igualmente, el genotipo 18/18 del polimorfismo CBS VNTR- 31pb, solo y cuando coexistía con el polimorfismo MTHFR C677T, se asoció con RCIU idiopático. Conclusiones: el metabolismo de la homocisteínametionina y folato es importante para el crecimiento y desarrollo del embrión-feto. El compromiso de estas rutas metabólicas se asocia a complicaciones del embarazo como RCIU idiopático. Los resultados preliminares de este estudio deben incentivar el estudio del metabolismo de la homocisteínametionina y folato en complicaciones del embarazo como la RCIU, así como en condiciones fisiológicas en el embarazo normal en nuestra población.

Objective: This work was aimed at evaluating the association between homocysteine-metionine and folate metabolism alteration and pregnancies complicated by idiopathic intrauterine growth restriction (IUGR). This was done by studying pre- and post-partum homocysteine, vitamin B12 and folate levels, as well as allele and genotype frequency for genetic polymorphisms from enzymes participating in the homocysteine-methionine and folate metabolic route in pregnant women having pregnancies complicated by idiopathic IUGR and physiological conditions during normal pregnancy. Materials and methods: This was an analytical observational (cases and controls) pilot study. Eight pregnant women suffering IUGR were studied, as well as 21 pregnant women as control whose pregnancy had no complications and healthy newborn. Folate, vitamin and B12 homocysteine concentrations as well as postpartum homocysteine levels were analyzed during the third trimester of pregnancy. The pregnant women’s genotypes were determined formethylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T, MTHFR A1298C, methionine synthase reductase (MTRR) A66G, cystathionine betasynthase (CBS) 844ins68, CBS 31pb VNTR, CBS C699T and CBS C1080T polymorphisms by polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP). Results: MTHFR C677T polymorphisms and the CBS 31bp VNTR 18/18 genotype (independently and in coexistence) were associated with low folate levels. The CBS 31bp VNTR 18/18 genotype alone and when coexisting with MTHFR C677T was associated with idiopathic IUGR. Conclusions: Homocysteine-methionine and folate metabolism is important for embryo-fetus growth and development. Compromise of these metabolic routes is associated with pregnancy complications such as idiopathic IUGR. This study's preliminary results should encourage studying homocysteine-methionine and folate metabolism in complications regarding pregnancy such as IUGR and in physiological conditions during normal pregnancy in our population.

Consumo alimentar e concentrações intra-eritrocitárias de folato em mulheres do Recife, Nordeste do Brasil / Folate food intake and red blood cell folate concentrations in women from Recife, Northeast of Brazil

Foi avaliado o consumo e concentrações intra-eritrocitárias de folato em mulheres do Recife, Nordeste, Brasil, mediante estudo de corte transversal, envolvendo 360 mulheres, de 15 a 45 anos, aleatoriamente rastreadas, por amostragem em dupla etapa, de 9 Unidades Públicas de Saúde, em 2007-2008. O consumo de folato foi avaliado pelo Questionário de Freqüência Alimentar Quantitativo e comparado com os valores da Dietary Reference Intakes-DRI’s. O status orgânico de folato foi avaliado pelas concentrações intra-eritrocitárias. A media geométrica do consumo diário de folato foi 627,1[IC95%600,4-655,0] µg/dia. A freqüência de mulheres com risco de ingestão de folato abaixo da recomendação foi 16,0% para adolescentes (<330µg/dia) e 6,3% para adultas jovens (<320µg/dia). A prevalência de mulheres cujo consumo excedeu o limite máximo tolerável de ingestão foi de 48,0% (>800µg/dia) e 13,7% (>1000µg/dia) para adolescentes e adultas, respectivamente. A média das concentrações de folato eritrocitário foi de 1797,8 ± 357,1 nmol/L. O consumo de alimentos-fonte de folato não mostrou correlação com as concentrações eritrocitárias (r= 0,058 e p= 0,274). Maiores concentrações de folato eritrocitário foram observadas em mulheres adultas jovens (p= 0,004) e entre aquelas com renda até dois salários mínimos (p= 0,042). Nas mulheres do Recife, tanto o consumo de alimentos-fonte de folato como as concentrações eritrocitárias de folato elevaram-se em patamares superiores às recomendações internacionais.

Folate food intake and red blood cell folate concentrations were assess in women from Recife, Northeast Brazil. Following a two stages sampling procedure, a cross-sectional study was carried out involving 360 women, between 15-45y, attending in nine Health Care Public Unit in 2007-2008. Folate intake was evaluated by a Quantitative Food Frequency Questionnaire, and compared with the values of the Dietary Reference Intakes- DRI’s. Folate status was evaluated by red blood cell folate concentrations. Geometric mean of folate intake was 627.1[IC95%600.4-655.0] µg/day. The frequency of women at risk for folate intake below the recommendation was 16.0% for adolescents (<330µg/ day) and 6.3% for young adult (<320µg/ day). The prevalence of women whose consumption exceeds the maximum tolerable intake was 48.0% (> 800µg/ day) and 13.7% (> 1000µg/ day) for adolescents and adults, respectively. The mean of red blood cell folate concentrations was 1797.8 ± 357.1nmol/L. Folate rich-food intake did not show any correlation with red blood cell folate concentrations (r= 0.058 and p= 0.274). Higher red blood cell folate concentrations were observed in adult young women (p=0.004) and among those with income up to two minimum wages (p=0.042). Folate rich-food intake as well as red blood cell folate concentrations among women from Recife were above the international recommendations.

Folate content and retention in selected raw and processed foods / Contenido de folatos y retención en determinados alimentos crudos y procesados

Adequate intake of folate reduced the risk of abnormalities in early embryonic brain development such as the risk of malformations of the embryonic brain/spinal cord, collectively referred to as neural tube defects (NTDs). Folate is extremely sensitive to destruction by heat, oxidation and UV light. The purpose of this study was to evaluate the use of different extraction procedures and enzymatic treatment to determine folate concentrations in variety of foods using a microbiological assay (MA) with Lactobacillus rhamnosus as the test organism. This study also aimed to evaluate the retention of folate in foods after using different cooking processes. Nine of the most commonly consumed foods in Argentina and that contain folate were analyzed: broccoli, spinach, potato, lentil, soy (raw and boiled); hen whole egg and yolks (raw, boiled and fried); beef liver (raw and cooked); strawberry (raw) and white bread. For this study, rat plasma (RP) and human plasma (HP) conjugases together with acetate and phosphate buffers were tested. In extraction step for all analyses, RP conjugase was selected since it was easily available in our laboratory and small quantities were required. The acetate buffer was chosen since better growth and more reproducible results were obtained in the different conditions assayed. The results allowed the foods to be grouped into a) rich sources of folate: hen eggs, yolks, spinach, soybean (raw) and strawberry (100 and 350mg/100g fresh weight (FW); b) good sources of folate: broccoli (raw), soybean (boiled), lentils (raw) and potato (56 to 83mg/100g FW) and c) moderate sources of folate: broccoli, lentils (boiled), white breads, onions and beef liver (15 to 30mg/100g FW). The folate retention was in the range 14-99% according to both type of food and method of processing. Contents and losses of folate vary widely according to type of food and cooking method.

La ingesta adecuada de folatos reduce el riesgo de las anormalidades en el desarrollo temprano del cerebro embrionario, tales como el riego de malformaciones en el cerebro/médula espinal, conocidas en conjunto como defectos del tubo neural (NTDs). Los folatos son extremadamente sensibles al tratamiento con calor, la oxidación y la luz UV. El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de diferentes procedimientos de extracción y de tratamientos enzimáticos para determinar el contenido de folato en distintos alimentos empleando un método microbiológico que utiliza el microorganismo Lactobacillus rhamnosus. En este trabajo se evaluó también la retención de folatos en alimentos sometidos a diferentes procesos de cocción. Se analizaron 9 de los alimentos que contienen folatos y más comúnmente consumidos en Argentina: brócoli, espinaca, papa, lente ja, soja (crudos y cocidos): huevo entero de gallina y yema (crudo, hervido y frito). Bife de hígado vacuno (crudo y cocido); frutillas (crudas) y pan: blanco. Se probó para este estudio conjugasas de plasma de rata (PR) y de plasma humano (PH) conjuntamente con buffers fosfato y acetato. En la extracción para todos los análisis se escogió la conjugasa de PR por ser accesible para nuestro laboratorio y por que se utiliza en pequeñas cantidades. El buffer acetato fue elegido debido a que se obtuvo resultados más reproducibles y un mejor crecimiento en las diferentes condiciones ensayadas. Los resultados permitieron agrupar los alimentos en: a) fuente rica de folatos: huevo y su yema, espinaca, soja (cruda) y frutilla (100 a 350mg/100g peso fresco); b) fuente buena de folatos: brócoli (crudo), soja (hervidas), lentejas (cruda) y papa (cruda y hervida) (56 a 83mg/100g peso fresco) y c) fuente moderada de folatos: brócoli y lentejas (hervidos), bife de hígado, pan blanco y cebollas (15 a 30mg/100g peso fresco). La retención de folato estuvo en el rango de 14-99% de acuerdo al tipo de alimento y el método de procesado. El contenido de folato y sus perdidas fueron muy variables dependiendo del alimento y del método de cocción empleados.

Micronutrient supplementation may reduce symptoms of depression in Guatemalan women / Potencial reducción de síntomas de depresión en mujeres en Guatemala mediante la suplementación con micronutrientes

Evidence for the impact of micronutrient supplementation trials on depression in women from developing countries is limited. This study examines this association and compares the impact of weekly versus daily combinations of micronutrient supplements on symptoms of depression. A randomized, positive-controlled trial was conducted in Guatemala. A total of 459 women were assigned randomly to 4 groups to receive weekly (5,000 or 2,800µg) or daily (400 or 200 µg) folic acid (FA) plus iron, zinc and vitamin B-12 for 12 weeks. Depression was measured using the Center for Epidemiologic Studies-Depression 20-item Scale (CES-D). A score=16 was used as an indication of depression. The association between micronutrient status and depression was assessed using baseline data. Generalized linear regression models were used to assess treatment effects. The baseline mean CES-D score was 17.1±8.5 and the prevalence of depression was 49.3 percent. Women in the lowest tertile of red blood cell folate (RBC) were 1.7 times more likely to be depressed than those in the highest tertile (OR=1.71; 95 percent CI: 0.91, 3.18). There were no associations between depression and serum folate, homocysteine, vitamin B-12, hemoglobin, ferritin or zinc (p > 0.05). Mean depression scores decreased by 2.3 points post-intervention and depression decreased to 37.7 percent, with no differences in degree of improvement by group (p = 0.64). Low RBC folate was associated with elevated symptoms of depression at baseline. Supplementation with FA-containing micronutrients may be equally efficacious in improving symptoms of depression when provided daily or weekly. Our findings that poor folate status may increase depression needs to be further investigated.

La evidencia del impacto de ensayos de suplementación con micronutrientes en mujeres con depresión en países en desarrollo es limitada. El presente estudio examina esta asociación y compara el impacto de varias combinaciones de micronutrientes proporcionadas de manera semanal o diaria en los síntomas de depresión, utilizando datos de un ensayo controlado (control positivo) y aleatorizado realizado en Guatemala. Un total de 459 mujeres fueron asignadas al azar entre cuatro grupos para recibir semanalmente (5.000 o 2.800 µg) o diariamente (400 o 200 µg) de ácido fólico (AF) combinado con hierro, cinc y vitamina B-12 durante 12 semanas. La depresión fue medida utilizando la escala de 20 ítems del Centro de Estudios Epidemiológicos de la Depresión (CES-D). Un puntaje =16 fue considerado indicativo de depresión. Se evaluó la asociación entre el nivel de micronutrientes en sangre y depresión utilizando datos provistos por la línea de base. Se utilizaron modelos de Regresión Linear Generalizada para evaluar los efectos del tratamiento. La media del puntaje de la línea de base CES-D fue de 17,1±8,5 y la prevalencia de depresión fue del 49,3 por ciento. Las mujeres en el tercil más bajo del folato eritrocitario presentaron 1,7 veces más probabilidades de estar deprimidas que aquellas en el tercil más alto (OR=1,71; 95 por ciento CI: 0,91, 3,18). No se encontró asociación entre depresión y folato sérico, homocisteína, vitamina B-12, hemoglobina, ferritina sérica o cinc (p>0,05). Los puntajes de depresión medios post-intervención disminuyeron en 2.3 puntos y la depresión se redujo a 37,7 por ciento, sin presentar diferencias en el grado de mejoría por grupo (p=0,64). En síntesis, el bajo nivel de folato eritrocitario se asoció a síntomas elevados depresivos en la línea de base. La suplementación con AF sumado a otros micronutrientes puede ser igualmente eficaz en la mejora de síntomas depresivos cuando provista diaria o semanalmente...

Homocisteína, folato e vitamina B12 em pacientes colombianos portadores de coronariopatia / Homocysteine, folate and vitamin B12 in colombian patients with coronary disease

OBJETIVO: Determinar a existência de associação entre os níveis plasmáticos de homocisteína, folato ou vitamina B12 e síndrome coronariana aguda em pacientes colombianos. MÉTODOS: Estudo caso-controle: foram 50 pacientes portadores de síndrome coronariana aguda e 50 pacientes ambulatoriais sem síndrome coronariana. Foram medidos os níveis de homocisteína, folato e vitamina B12 por meio de imunoensaio por quimioluminescência. Foram também medidos os níveis de colesterol e frações, triglicérides, uréia, creatinina, hemoglobina e hematócrito. RESULTADOS: As concentrações plasmáticas médias de homocisteína foram significativamente diferentes entre os casos (12,4 æmol/l ± 6,0) e os controles (9,7 æmol/l ± 2,4), p=0,01. Os níveis de ácido fólico dos casos foram menores que os dos controles (respectivamente 10,5 ng/ml ± 3,5 x 12,6 ng/ml ± 3,6; p=0,01). Foi observada relação inversa entre os níveis de folato e os de homocisteína. Não houve relação entre os níveis de vitamina B12 e os de homocisteína. Houve diferença significativa nos níveis de triglicérides entre os grupos caso e controle (respectivamente 136,91 ± 67,27 x 174,3 ± 77,6; p=0,01). A razão das chances para hiper-homocisteinemia na síndrome coronariana aguda foi de 4,45 (intervalo de confiança de 95 por cento: 1,5 - 13,3). CONCLUSÃO: O presente estudo demonstrou associação significativa entre os níveis de homocisteína e síndrome coronariana aguda em pacientes colombianos semelhante à encontrada em populações européias e norte-americanas. Houve correlação negativa entre os níveis plasmáticos de homocisteína e os de folato. Não houve associação entre os níveis plasmáticos de homocisteína e os de vitamina B12.

OBJECTIVE: To determine the occurrence of association between homocysteine, folate, or vitamin B12 plasma levels and acute coronary syndrome in Colombian patients. METHODS: Case control study: cases were 50 patients with acute coronary syndrome and controls were 50 outpatients without coronary syndrome. Homocysteine, folate and vitamin B12 levels were determined by means of chemiluminescence immunoassay. Cholesterol and lipoproteins, triglycerides, BUN, creatinine, hemoglobin and hematocrit were also measured. RESULTS: Mean homocysteine plasma concentrations were significantly different between cases (12.4 æmol/l ± 6.0) and controls (9.7 æmol/l ± 2.4), p=0.01. The folic acid levels of the cases were lower than those of the control patients (10.5 ng/ml ± 3.5 vs 12.6 ng/ml ± 3.6, respectively, p=0.01). An inverse relationship was found between folate and homocysteine levels. No relationship was observed between vitamin B12 levels and homocysteine levels. There was a significant difference in triglyceride levels between case and control groups (136.91 ± 67.27 vs 174.3 ± 77.6, respectively, p=0.01). The odds ratio for hyperhomocysteinemia in acute coronary syndrome was 4.45 (95 percent confidence interval: 1.5 - 13.3). CONCLUSION: The present study found a significant association between homocysteine levels and acute coronary syndrome in Colombian patients, similarly to the European and North American populations. There was a negative correlation between homocysteine plasma levels and folate levels. No association between plasmatic levels of homocysteine and those of vitamin B12 was observed.